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產地 | 進口、國產 |
保存條件 | 低溫冷藏 |
品牌 | 帛科 |
貨號 | E0861 |
用途 | 公司產品僅用于科研 |
組織來源 | 視網膜;神經節細胞 |
細胞形態 | 詳見說明書 |
是否是腫瘤細胞 | 否 |
CAS編號 | |
保質期 | 詳見說明書 |
器官來源 | 詳見說明書 |
免疫類型 | 詳見說明書 |
品系 | 詳見說明書 |
生長狀態 | 貼壁 |
物種來源 | 大鼠 |
包裝規格 | 1×106 |
純度 | 詳見說明書% |
是否進口 | 是 |
細胞的凍存:
1.先將凍存管放入4℃冰箱,約40min。
2.接著置于-20℃冰箱,約30-60min。
3.置于-80超低溫冰箱中放置過夜。
4.置于液氮罐中長期保存。
5產品僅用于科研同時做好凍存記錄,在自己的筆記本和凍存記錄本上均要記錄。
產品名稱 | RGCs細胞 |
單位 | T25/瓶 |
貨號 | E0861 |
產品簡稱:RGCs細胞
中文名稱:大鼠視網膜神經節細胞
規格:1×106
種屬:大鼠
來源:視網膜;神經節細胞
培養基:DMEM
狀態:貼壁
單位:T25/瓶
貨號:E0861
注意事項:
1.使用DMSO前,不需要進行高壓滅菌,它本身就有滅菌的作用。高壓滅菌反而會破華它的分子結構,以至于降低冷凍保護效果。在常溫下,DMSO對人體有害,故在配制時*戴上手套操作。
2.不宜將凍存細胞放置在0℃~-60℃這一溫度范圍內過久,低溫損傷主要發生在這一溫度區內,是“危險溫區”。
3.注意定期檢查液氮罐內液氮量,及時添加。
具體步驟:
RGCs細胞一. 水的制備:
帛科細胞培養用水必須非常純凈,不含有離子和其他的雜質。需要用新鮮的雙蒸水、三蒸水或純凈水
二.PBS的制備與消毒(也可用于其它BSS,如:Hanks,D-Hanks液的配制):
1.溶解定容:將藥品(NaCl 8.0g,KCl 0.2g,Na2HPO4·H2O 1.56g,KH2PO40. 2g )倒入盛有雙蒸水的燒杯中,玻璃棒攪動,充分溶解,然后把溶液倒入容量瓶中準確定容至1000ml,搖勻即成新配制的PBS溶液。
2.移入溶液瓶內待消毒:將PBS倒入溶液瓶(大的吊針瓶)內,蓋上膠帽,并插上針頭放入高壓鍋內8磅消毒20分鐘。注意高壓消毒后要用滅菌蒸餾水補充蒸發掉的水份。
三. 胰蛋白酶溶液的配制與消毒:
胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關,在pH為8.0、溫度為37℃時,胰酶溶液的作用能力*。使用胰酶時,應把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質克降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時應選用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。終止消化時,可用含有血清培養液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用。
1.稱取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液濃度為0.25%,用電子天平準確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水(若用雙蒸水需要調PH到7.2左右)或PBS(D-hanks)液中。攪拌混勻,置于4℃內過夜。
2.用注射濾器抽濾消毒:配好的胰酶溶液要在超凈臺內用注射濾器(0.22微米微孔濾膜)抽濾除菌。然后分裝成小瓶于-20℃保存以備使用。
細胞計數:
1.蓋好蓋玻片:取一套血球計數板,將特制的蓋玻片蓋在血球計數槽上。
2.制備計數用的細胞懸液:用吸管吸5滴細胞懸液到一離心管中,加入5滴臺盼藍染液(0.4%)或苯胺黑,活細胞不會被染色,加入染液后就可以在顯微鏡下區別活細胞和死細胞。
3.將細胞懸液滴入計數板:將待測細胞懸液吹均勻,然后吸取少量懸液沿蓋片邊緣緩緩滴入,要保證蓋片下充滿懸液,注意蓋片下不要有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中。
4.統計四個大格的細胞數:將血球計數板放于顯微鏡的低倍鏡下觀察,并移動計數板,當看到鏡中出現計數方格后,數出四角的四個大鉻(每個大格含有16個中鉻)中沒有被染液染上色的細胞數目。
5.計算原細胞懸液的細胞數:按照下面公式計算細胞密度:
(細胞懸液的細胞數)/ml= ( 四個大格子細胞數/4) ×2×104
說明:公式中除以4因為計數了4個大格的細胞數。
公式中乘以2因為細胞懸液于染液是1:1稀釋。
公式中乘以104因為計數板中每一個大格的體積為:
1.0mm(長)×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm3 而 1ml=1000mm3
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