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上海帛科生物技術有限公司
   
     
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LN299細胞
  • 品牌:帛科
  • 產地:進口、國產
  • 貨號:E01009
  • 價格: ¥2000/株
  • 發布日期: 2020-10-08
  • 更新日期: 2025-03-18
產品詳請
產地 進口、國產
保存條件 低溫冷藏
品牌 帛科
貨號 E01009
用途 公司產品僅用于科研
組織來源 膠質瘤
細胞形態 詳見說明書
是否是腫瘤細胞
CAS編號
保質期 詳見說明書
器官來源 詳見說明書
免疫類型 詳見說明書
品系 詳見說明書
生長狀態 貼壁
物種來源
包裝規格
純度 詳見說明書%
是否進口

帛科細胞培養器材的選擇:從培養量大小來講,從小到大有細胞培養板、細胞反應管、搖瓶、細胞培養瓶、細胞工廠等,更大就是反應器了。

產品名稱

規格

貨號

LN299細胞

E01009

產品簡稱:LN299細胞
中文名稱:人細胞

規格:瓶

種屬:人

來源:

培養基:DMEM

狀態:貼壁

單位:

貨號:E01009

帛科細胞培養瓶培養面積從25-225平方厘米不等,一般都經過表面改性處理,適合細胞貼壁和生長。225ml 175ml的多用于大規模培養時用(如單克隆細胞的培養等),75ml的多用于一般性細胞實驗用(一般性的傳代,保存細胞,為實驗提供細胞等),25ml一般是用來復蘇細胞或細胞較少時的培養,還有做原代細胞時也可以做多瓶而避免交叉污染。產品僅用于科研
細胞培養的具體步驟和注意事項:
1.細胞復蘇
將凍存細胞從液氮中取出后,在37水浴鍋內不斷搖動促進其融化。將融化的細胞移入離心管中,加入37oC預熱的DMEM完全培養基中(其中胎牛血清約為10%),輕輕吹勻,離心,500g離心2min,棄上清液。
加入DMEM完全培養基清洗,棄上清液。加入DMEM完全培養基,輕輕吹打混勻,制成細胞懸液,接種于培養皿/瓶中,在含5% CO2的細胞培養箱中培養。
2.
細胞傳代
帛科細胞密度達到80%~90%(過量不足,過晚細胞狀態不佳,1:21:10以上的比率傳代培養,一般1:31:5細胞一代,即從細胞接種到分離再培養的一段時間,非細胞有絲分裂次數)時,去掉完全培養基,用1X PBS清洗2次。
加入胰蛋白酶(注意:消化液的量以蓋住細胞**消化溫度是37oC。顯微鏡下觀察細胞:倒置顯微鏡下觀察消化細胞,若胞質回縮,細胞之間不再連接成片,表明此時細胞消化適度)進行消化,放入細胞培養箱中約2-3min 
加入適量DMEM完全培養基終止胰蛋白酶消化,轉移至離心管后500g離心2min,棄上清液,再加入DMEM完全培養基清洗,棄上清液。
加入DMEM完全培養基,輕輕吹打混勻,吸取10微升進行計數,然后按照所需細胞量在含5% CO2的細胞培養箱繼續培養。

3.細胞凍存
當細胞密度達到80%~90%時,去掉完全培養基,用1X PBS清洗2次。加入胰蛋白酶進行消化,放入細胞培養箱中約2-3min。加入DMEM完全培養基終止胰蛋白酶消化,轉移至離心管后500g離心2min,棄上清液,再加入DMEM完全培養基清洗,棄上清液。加入lml凍存液(90%胎牛血清,10% DMSO 
一般來講血清含量可以在10%-90%之間調整,凍存液中加入血清一方面可以為細胞提供營養,另一方面可以在細胞凍存過程中提供非滲透性保護物質,如蔗糖,白蛋白等從而更好地保護細胞),放入凍存管內(管內有異丙醇,以保證溫度降低的速度),立即放入4oC冰箱中凍存30min,然后放入-20oC冰箱中凍存30min,再置于-80冰箱內過夜。
*
天放入液氮中,可以保存至少兩年,如不放人液氮,可以保存三個月。 
細胞凍存和復蘇的原則是:慢凍速融,這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑,會導致細胞內冰晶的產生,從而使細胞產生內源性的機械損傷,引起細胞內環境滲透壓,PH,電解質等的改變,進而促使細胞死亡。

注意事項:
LN299細胞1)預熱培養用液:把已經配制好的裝有培養液、PBS和胰蛋白酶的瓶子放入37水浴鍋內預熱;
2)用75%酒精擦拭經過紫外線照射的超凈工作臺和雙手;
3)正確擺放使用的器械:保證足夠的操作空間,不僅便于操作而且減少污染;
4)點燃酒精燈:注意火焰不能太小;
5)嚴格的無菌操作;
6)貼壁細胞消化適度:消化的時間受消化液的種類、配制時間、加入培養瓶中的量等諸多因素的影響,消化過程中應該注意培養細胞形態的變化,一旦胞質回縮,連接變松散,或有成片浮起的跡象就要立即終止消化;
7)傳代細胞所有的操作盡量靠近酒精燈火焰。每次*只進行一種細胞的操作,每種細胞使用一套器材。避免交叉感染;
8)傳代細胞瓶口每次打開或者關閉都需要在酒精燈上消毒。

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