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產地 | 進口、國產 |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3823 |
用途 | 公司產品僅用物科研 |
包裝規格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
44,同人病毒4型PCR檢測試劑盒供應 | Human Herpesvirus 4 (HHV4,EB) )4 PCR | BKP3823 |
技術服務內容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優勢:
1. 特異性:44,同人病毒4型PCR檢測試劑盒供應使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析,經過GenBank及自建龐大數據庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段,可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現性:該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證,重現性為100%。
3. 靈敏性:該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優勢2:該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
肺動脈成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)D-山梨醇shēng huà shì jì容量:25克
Spike Others MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein S1 (aa 1-725) 人細胞裂解液 (陽性對照) 言醋-4,4-聯 4,4'-DIPYRIDYL DIxy7noCHLORIDq 796-7-3
人結直腸腺癌細胞;Caco-2DL-2-基shēng huà shì jì容量:1公斤
293T細胞,SV40永生化的人胚腎上皮細胞 蚊子細胞,C6/36細胞 CL-0250801-D (人巨細胞性細胞)5×106cells/瓶×2三嶙酸脫氧核糖核苷酸shēng huà shì jì容量:RT50克
ZR-75-1(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2613-45-62.4-二甲氧基2,4-Dimetxoxy
U-937細胞,組織細胞瘤細胞 低分化細胞系,SUNE-1細胞 CL-03142V6.11(人胚腎細胞)5×106cells/瓶×2鹽酸雙環胺(標準品)DICYCLOMINE HYDROCHLORIDE質量規格:供TCL鑒別用
敘利亞倉鼠細胞系;Syrian Hamster AV12氯解1定(標準品)2-Pyridinealdoxime methochloride質量規格:HPLC法含量測定
MBL1 Others Mouse 小鼠 MBL1 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸賽庚啶(標準品)CYPROHEPTADINE HYDROCHLORIDE質量規格:HPLC法含量測定
原代系膜細胞培養特制添加劑Many types of cells包裝:5/2.5/1ml(標準品)Amidopyrine/aminopyrine質量規格:含量測定
CDK16 Others Human 人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 沙利度胺(標準品)Thalidomide質量規格:含量測定
44,同人病毒4型PCR檢測試劑盒供應C2C12, 小鼠肌原細胞 人細胞,DU145細胞 SK-MES-1(人細胞)白楊素(標準品)Chrysin質量規格:HPLC>98%,分析標準品
人肺巨細胞癌低轉移細胞株;PG-LH7白楊素Chrysin質量規格:>98%,BR
CPM Others Human 人 CPM / Carboxypeptidase M 人細胞裂解液 (陽性對照) 刺芒柄花素(標準品)Formononetin質量規格:HPLC>98%,分析標準品
人肝星形細胞RNAHHSteC miRNA5 μg刺芒柄花素Formononetin質量規格:>98%,BR
TCN2 Others Mouse 小鼠 TCN2 / anscobalamin-II 人細胞裂解液 (陽性對照) 大豆素,黃豆苷元(標準品)Daidzein質量規格:HPLC>98%,分析標準品
細胞名稱 種屬1克AR,99.5%
AGER Others Human 人 AGER / RAGE 人細胞裂解液 (陽性對照) [2-(基炳1酰氧)基]二基-(3-磺炳基)輕氧化銨 3-[Dimqthyl-[2-(2-mqthylprop-2-qnoyloxy)qthyl]czcniumyl]propcnq-1-sulfonctq 3637/6/1
人骨骼肌成肌細胞總RNAHSkMM NAL-Histidine(S)-2-基-3-(4-咪唑基)酸10克BR,99%
HSPA1A Others Human 人 HSP70 / HSPA1A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) Bariumchromate902鋇黃100克BR,98%
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS5A¤;;Wood alcohol
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。