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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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OverExpress C43(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞
起訂量 (瓶)價(jià)格
1-102350 /瓶
≥101250 /瓶
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國產(chǎn)
  • 貨號:BK-G63283
  • 發(fā)布日期: 2021-02-21
  • 更新日期: 2025-03-14
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進(jìn)口、國產(chǎn)
保存條件 低溫冷藏
品牌 帛科
貨號 BK-G63283
用途 產(chǎn)品僅用于科研
組織來源 詳見說明書
細(xì)胞形態(tài) 詳見說明書
是否是腫瘤細(xì)胞
CAS編號
保質(zhì)期 詳見說明書
器官來源 詳見說明書
免疫類型 詳見說明書
品系 詳見說明書
生長狀態(tài) 詳見說明書
物種來源 詳見說明書
包裝規(guī)格 100ul*10 100ul*50
純度 %
是否進(jìn)口

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

規(guī)格參數(shù):

產(chǎn)品名稱:OverExpress C43(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞
規(guī)格 :100ul*10 100ul*50
分類:表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
用途:生化試劑(用于科研試驗(yàn)研究)
儲存條件: -70℃保存,必須加干冰運(yùn)輸。自收貨之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6個(gè)月。
外觀:(性狀) 干冰運(yùn)輸,單加10kg干冰費(fèi)
單位: 袋

注意事項(xiàng):


1. 感受態(tài)細(xì)胞*在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過長,長時(shí)間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?;蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
同一批感受態(tài)細(xì)胞,用含目的片段的T載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化(陽性對照)能長出密密麻麻的菌落,而用另一種載體和目的片段的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化,卻一個(gè)菌都沒長出來,重復(fù)了三次都這樣。請問這是感受態(tài)細(xì)胞的制作不過關(guān),還是連接出了問題?哪個(gè)可能性大些?
答:應(yīng)該是連接的問題。所有連接反應(yīng)建議同時(shí)轉(zhuǎn)化酶切后的質(zhì)粒作為另一個(gè)陰性對照,確定酶切是否完全。同時(shí)連接前請確定質(zhì)粒和片段濃度達(dá)到最小連接量的要求。
感受態(tài)細(xì)胞放到-80冰箱了有半年了,還能用來轉(zhuǎn)化質(zhì)粒嗎?
答:如-80冰箱儲存過程中沒有發(fā)生凍融的情況,是可以用來轉(zhuǎn)化的,但是由于凍存時(shí)間過長,轉(zhuǎn)化效率會有所下降,如果用于普通的質(zhì)粒重轉(zhuǎn)或TA克隆等高效連接體系也是可以的,如珍貴的樣品請選用較為新鮮的感受態(tài)細(xì)胞。

正癸醇(Standard for GC,≥99.5%(GC))n-Decyl alcohol質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC)  小鼠ELISA試劑盒  素B2(TXB2)ELISA試劑盒 ,英文名: TXB2 ELISA Kit

琥珀(standard for GC,≥99.6%(GC))Diethyl succinate質(zhì)量規(guī)格:standard for GC,≥99.6%(GC)  小鼠前動力蛋白2(PK2)ELISA試劑盒 ,英文名: PK2 ELISA Kit  MouseCompleme1inhibitoraoaibody,C1INHELISA試劑盒小鼠補(bǔ)體1抑制物抗體(C1INH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

癸二(Standard for GC, ≥99.5% (GC))Diethyl sebacate質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC, ≥99.5% (GC)  人維生素D2(VD2)ELISA檢測試劑盒HumanVitaminD2,VD2ELISAKit 96T/48T  ELISAKitS-100小鼠S100蛋白規(guī)格:48T/96T

二十二烷(standard for GC,≥99.0%(GC))Docosane質(zhì)量規(guī)格:standard for GC,≥99.0%(GC)  大鼠整合素αM((ITG αM/CD11b)試劑盒 Rat Iegrin αM,ITG/CD11b ELISA Kit  Chickeoxoplasmacirculatingaigen,TCAELISAKit雞弓形蟲循環(huán)抗原(TCA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

小鼠兒茶酚胺(CA)ELISA檢測試劑盒Mousecatecholamine,CAELISAKit 96T/48T  57420-46-9胡麻屬苷品牌  Sesamoside

人抗α-胞襯蛋白抗體(IgG)試劑盒 Human ai-alpha-Fodrin aibody IgG ELISA Kit  98243-57-3湖貝甲素規(guī)格  Hupehenine

RabbitUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAKit兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  535-83-1葫蘆巴堿  Trigonelline

載玻片細(xì)胞GSK-3BETA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20  1370264-16-6擬人參皂苷-Rh2說明書  3-O-β-D-glucopyranosyl-3β,12β,25-trihydroxyldammar-(E)-20(22)-ene

Humanβ-Lactamaseinhibitors,BLIELISA試劑盒人β內(nèi)酰胺酶抑制劑(BLI)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  6199-67-3葫蘆素B品牌  Cucurbitacin B

59-30-3葉酸說明書  Folic acid   豬早老素2(PS-2)試劑盒 Pig Presenilin 2,PS-2 ELISA Kit

59219-65-7豯薟苷品牌  Darutoside  豬早老素1(PS-1)試劑盒 Pig Presenilin 1,PS-1 ELISA Kit

590-46-5鹽酸甜菜堿說明書  Betaine   豬載脂蛋白E(Apo-E)試劑盒 Pig apolipoprotein E,Apo-E ELISA Kit

58812-37-6川楝素規(guī)格  Toosendanin   豬載脂蛋白B100(apo-B100)試劑盒 Porcine apo-B100 ELISA Kit

58749-23-8甘草查爾酮B規(guī)格  Licochalcone B   豬載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA檢測試劑盒PorcineapoproteinB100,apo-B100ELISAKit 96T/48T

OverExpress C43(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞操作方法:

1. DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

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