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上海帛科生物技術有限公司
   
     
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NS0 殘留 DNA 檢測試劑盒
  • 品牌:帛科
  • 產地:國產
  • 型號:50T
  • 貨號:BK-P96321
  • 發布日期: 2022-10-12
  • 更新日期: 2025-03-14
產品詳請
產地 國產
保存條件 詳見說明書
品牌 帛科
貨號 BK-P96321
用途 僅供科研實驗
檢測方法 PCR法
CAS編號
保質期 詳見說明書
適應物種 詳見說明書
檢測限
數量 1000
包裝規格 50T
標記物
純度 %
樣本
應用
是否進口

NS0 殘留 DNA 檢測試劑盒

(PCR-熒光探針法)

NS0 殘留DNA 檢測試劑盒是用于定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成 品中殘留的 NS0 宿主細胞殘留 DNA。

試劑盒利用 Taqman 探針法,定量檢測樣本中NS0 殘留 DNA 。該方法具有速度快、 特異性高、  性能可靠且 檢測限可達到 fg 級別。

試劑盒組份:

試劑

裝量

貯存條

NS0 control DNA

40ul×1

-20oC

DNA dilution buffer

6ml ×1 

-20oC

2×Taqman master mix (+UNG/ROX)

0.75ml ×2

-20oC

1NS0 qPCR mix

0.3ml ×1

-20oC

RNase-Free H2O

1.5ml×1

-20oC

規格 100  反應

適用機型:

PRISM 7500 Real-Time PCR System (ABI)

StepOne Plus Real-Time PCR System (ABI)

LightCycler 480 (Roche)

AriaMX (Agilent Technologies)

CFX (BIO-RAD)


NS0 殘留 DNA 檢測試劑盒實驗操作過程:

 

一、 NS0 DNA 定量參考品的稀釋及標準曲線的制備

試劑盒中提供的 DNA dilution buffer  NS0 control DNA 進行梯度稀釋,稀釋濃度依 次為 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul  3fg/ul。具體操作如下:           1.將試劑盒中的 NS0 control DNA  DNA dilution buffer 置于冰上融化,待完全融化后,輕微振蕩混勻,簡短快速離心。

2. 6 支干凈 1.5ml 離心管,分別標記為 SD1 SD2 SD3 SD4 SD5 SD6。

3 ,SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer,其余管中分別加入 180ul DNA dilution buffer 4, 2ul NS0 control DNA 加入 SD1 管中,  然后渦旋振蕩混勻 5- 10S 后短時快速離心 5S,渦 旋振蕩和快速離心各重復 3 次。

5,按表 2 依次進 6 次梯度稀釋操作,稀釋操作同步驟 4。

 2. NS0 control DNA 的稀釋

 

釋管

釋體積

濃度

SD1

2ul NS0 control DNA+198ul DNA dilution buffer

300 pg/ul

SD2

20ul SD1+180ul DNA dilution buffer

30 pg/ul

SD3

20ul SD2+180ul DNA dilution buffer

3 pg/ul

SD4

20ul SD3+180ul DNA dilution buffer

300 fg/ul

SD5

20ul SD4+180ul DNA dilution buffer

30 fg/ul

SD6

20ul SD5+180ul DNA dilution buffer

3 fg/ul

qPCR 結果分析(以 ABI 7500 為例)

1. Results  Amplification  plot 面板中, Threshold 設置為 0.05 ,點擊 Analyze,此時可 初步查看擴增曲線的形態是否正常。

2. Results  Plate 面板中,將標準曲線孔的 Task 一欄設置為 Standard,并且在 Quantity 一欄分別賦值為 3000 、300 、30 、3 、0.3 0.03 (含義為每孔的 DNA 量, 單位為 pg), 并且 在相應  Sample Name 一欄命名為 SD1 SD2 SD3 SD4 SD5 SD6。

3. Results  Plate 面板中,將無模板對照 NTC 孔的 Task 一欄設置為 NTC,將陰性質控NEG 孔、待測樣本孔、樣本 ERC 孔的 Task 一欄設置為 Unknown,并且在相應的 Sample Name 一欄中命名為 NTC 、NEG 、S 、ERC ,之后點擊開始鍵。

4. Results  Standard Curve  面板中,可讀取標準曲線的斜率(Slope)、截距(Intercept)、R2

 

5. Results  Report 面板中, Mean Quantity 一欄可讀取無末班對照 NTC、陰性質控 NEG、 待測樣本、樣本 ERC 的檢測值。后續可在檢測報告中將單位換算為 pg/ml  樣本。

 

注:根據待測樣本和樣本 ERC 的檢測結果計算加樣回收率,加樣回收率要求在 50%- 150%之 間。

 


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