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芽囊原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒質量檢測

發表時間:2020-12-10

芽囊原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒質量檢測:

1)紫外吸收法測定

先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。

濃度測定

A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。具體計算如下:

RNA溶于40 l DEPC水中,取5ul,1:100稀釋至495的TE中,測得A260 = 0.21

RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g

取5ul用來測量以后,剩余樣品RNA為35 l,剩余RNA總量為:

35 l × 0.84 gl = 29.4 g

②純度檢測

RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度,比值范圍1.8到2.1。

2)變性瓊脂糖凝膠電泳測定

①制膠

1g瓊脂糖溶于72ml水中,冷卻至60℃,10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。

10×MOPS電泳緩沖液

濃度 成分

0.4M MOPS,pH 7.0

0.1M 乙酸鈉

0.01M EDTA

灌制凝膠板,預留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝后取下梳子,將凝膠板放入電泳槽內,加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個毫米。

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