牛睪丸透明質酸酶樣品DNA的制備:

1.用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。。也可以選購本公司的一管式病毒DNAOUT或其升級版柱式病毒 DNAOUT。本試劑盒免費贈送15次DNA病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAOUT的成分)。稀釋陽性對照(以10E2-10E7這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行干萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為86bp的DN段作為陽性對照。

2.標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2

3用帶芯槍頭分別加入45L模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同

4.在7號管中加入5uL1x10E8持貝L的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝L的陽性對照。放冰上待用。5.換槍

頭,在6號管中加入5uL1×10E7拷貝L的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝μ的陽性對照。放冰

6換槍頭,在5號管中加入5uL1×10E6拷貝L的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝L的陽性對照放冰上待用。

7換槍頭,在4號管中加5uL1x10E5拷貝L的陽性對照到4號管中,得1×10E4拷貝L的陽性對照。放冰上待用。

8.重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置qPCR反應(20L體系,在樣品制備室進行

9.在PCR管中加入下列成分(待測樣品需要做三次重復,下表只列出一次。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加)注意事項。