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植物專用蛋白酶抑制劑混合液反應(yīng)五要素

發(fā)表時(shí)間:2022-03-01
植物專用蛋白酶抑制劑混合液反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

磷酸化DNA依賴性蛋白激酶抗體 大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA Kit
磷酸化DNA依賴性蛋白激酶抗體 大鼠胱天蛋白酶8(Casp-8)ELISA Kit
蓬亂蛋白2抗體 大鼠胱天蛋白酶7(CASP7)ELISA Kit
防御素α5抗體 大鼠胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)ELISA Kit
鋅離子結(jié)合蛋白DTX2抗體 大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)ELISA Kit
EYA3蛋白抗體 大鼠瓜氨酸ELISA Kit
刺痛感蛋白抗體 大鼠固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1C(SREBP-1C)ELISA Kit
翻譯延伸因子EF-1 α2抗體 大鼠固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1A(SREBP-1A)ELISA Kit
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磷酸化真核延伸因子激酶2抗體 大鼠骨鈣素(OT)ELISA Kit
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延伸因子結(jié)合蛋白EFTUD2抗體 大鼠谷胱甘肽還原酶(GR)ELISA Kit
表皮生長(zhǎng)因子樣蛋白6抗體 大鼠谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)ELISA Kit
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核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ENT2抗體 大鼠谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶Mu1(GSTM1)ELISA Kit
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